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bacilles_cereus_dosage_de_la_toxine [2026/02/05 11:57] – [D. BILAN] techmicrobiobacilles_cereus_dosage_de_la_toxine [2026/02/07 11:24] (Version actuelle) – [## 3. Détection de la bactérie vs de la toxine] techmicrobio
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 Surveillance microbiologique de routine : Surveillance microbiologique de routine :
  
-  * Liste à puceDénombrement de B. cereus selon ISO 7932 à différents stades (matières premières, fin de fabrication, fin de vie   * produit), en particulier pour produits cuits réfrigérés, plats traiteur, riz, produits laitiers, poudres infantiles.+  * Dénombrement de B. cereus selon ISO 7932 à différents stades (matières premières, fin de fabrication, fin de vie   * produit), en particulier pour produits cuits réfrigérés, plats traiteur, riz, produits laitiers, poudres infantiles.
   * Utilisation d’outils rapides (boîtes prêtes à l’emploi, kits immunologiques) comme pré‑screening, complétés par analyses de confirmation.   * Utilisation d’outils rapides (boîtes prêtes à l’emploi, kits immunologiques) comme pré‑screening, complétés par analyses de confirmation.
  
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 - Pour un laboratoire équipé en spectrométrie de masse cherchant un outil de routine sur les souches ou les aliments : MALDI‑TOF est nettement plus rapide, spécifique et intégrable dans le flux de travail que les bioessais. [frontiersin](https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.511674/full)   - Pour un laboratoire équipé en spectrométrie de masse cherchant un outil de routine sur les souches ou les aliments : MALDI‑TOF est nettement plus rapide, spécifique et intégrable dans le flux de travail que les bioessais. [frontiersin](https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.511674/full)  
 - Pour des études mécanistiques ou la confirmation de la toxicité mitochondriale (corrélation dose‑effet, comparaison d’analogues) : les bioessais restent précieux car ils mesurent directement l’activité biologique de la céréulide et de ses dérivés. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/) - Pour des études mécanistiques ou la confirmation de la toxicité mitochondriale (corrélation dose‑effet, comparaison d’analogues) : les bioessais restent précieux car ils mesurent directement l’activité biologique de la céréulide et de ses dérivés. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/)
-====== D. BILAN ======+======= D. Consensus ====== 
 +# **Détection de la toxine émétique de Bacillus cereus (céréulide) dans les aliments : normes et méthodes** 
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 +**En pratique, les textes officiels s’appuient sur des méthodes LC‑MS/MS normalisées (notamment ISO 18465) pour **quantifier le céréulide** dans les aliments, complétées par des PCR sur les souches et quelques méthodes rapides comme le MALDI‑TOF.** 
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 +===== ## 1. Textes officiels et normes ===== 
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 +- Une méthode de référence européenne/ISO existe : **EN‑ISO 18465:2017**, basée sur LC‑MS/MS avec étalon interne, validée sur de nombreuses matrices (riz, pâtisseries, saucisses, pancakes, lait infantile, etc.)  (Veld et al., 2019; Masquelier et al., 2023; Dietrich et al., 2021; Bauer et al., 2010).   
 +- Cette norme est explicitement citée comme **méthode standard** pour les produits destinés à la consommation humaine  (Masquelier et al., 2023).   
 +- La validation inter‑laboratoires montre une **très bonne répétabilité et reproductibilité** (RSD généralement <10 %, recouvrements ≈ 95–100 %)  (Veld et al., 2019; Masquelier et al., 2023; Delbrassinne et al., 2012; Bauer et al., 2010). 
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 +===== ## 2. Panorama des méthodes éprouvées ===== 
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 +==== ### Méthodes chimiques / instrumentales ==== 
 + 
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 +| Objectif | Méthode clé | Sensibilité / atouts | Citations | 
 +|---------|-------------|----------------------|-----------| 
 +| Quantification de référence | LC‑MS/MS (SIDA, étalon ^13C‑céréulide) | LOQ ~0,3–1 µg/kg ; haute justesse |  (Veld et al., 2019; Masquelier et al., 2023; Delbrassinne et al., 2012; Marxen et al., 2015; Bauer et al., 2010; Rønning et al., 2015)| 
 +| Variantes rapides matrices ciblées (riz, pâtes…) | LC‑MS/MS + QuEChERS ou extraction simplifiée | LOQ ~0,5–2 µg/kg, procédures simplifiées |  (Koike et al., 2024; Yamaguchi et al., 2013; Cui et al., 2023)| 
 +| Détection rapide sur colonies / screening aliments | MALDI‑TOF MS (avec ou sans matrice) | Détection directe de pics m/z 1175–1191 ; LOD jusqu’à 30 pg/mL |  (Ducrest et al., 2019; Koike et al., 2024; Dietrich et al., 2021; Doellinger et al., 2019)| 
 +| Méthodes de labo plus simples | Chromatographie en phase inversée (RPC) couplée ou non à MS | Outil robuste, économique pour recherche |  (Kalbhenn et al., 2021)| 
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 +**Figure 1:** Principales méthodes validées pour doser le céréulide. 
 + 
 +===== ## 3. Détection de la bactérie vs de la toxine ===== 
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 +- **Culture sur milieux sélectifs + dénombrement** reste la base pour les “B. cereus présomptifs”, mais ne renseigne pas sur la toxigénicité  (Ramarao et al., 2020; Jovanovic et al., 2021).   
 + 
 +- **PCR ciblant les gènes ces/ces‑NRPS** est le **gold standard** pour identifier les souches émétiques productrices de céréulide  (Meng et al., 2022; Ramarao et al., 2020; Dietrich et al., 2021; Jovanovic et al., 2021).   
 + 
 +- Les **méthodes immunologiques/bioessais** (HEp‑2, tests boar sperm, etc.) existent mais sont moins spécifiques que LC‑MS/MS pour le céréulide lui‑même  (Masquelier et al., 2023; Koike et al., 2024; Yamaguchi et al., 2013; Jovanovic et al., 2021).   
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 +===== ## Conclusion ===== 
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 +Les textes officiels et la pratique de laboratoire convergent : la **quantification du céréulide dans les aliments repose aujourd’hui principalement sur LC‑MS/MS normalisée (ISO 18465), avec étalon interne isotopique en référence**, la PCR servant à cribler les souches émétiques et le MALDI‑TOF comme outil rapide de confirmation ou de screening. 
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 +## References 
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 +Meng, J., Liu, Y., Shen, X., Wang, J., Xu, Z., Ding, Y., Beier, R., Luo, L., Lei, H., & Xu, Z. (2022). Detection of emetic Bacillus cereus and the emetic toxin cereulide in food matrices: Progress and perspectives. *Trends in Food Science &amp; Technology*. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2022.03.023 
 +  
 +Veld, P., Van Der Laak, L., Zon, M., & Biesta-Peters, E. (2019). Elaboration and validation of the method for the quantification of the emetic toxin of Bacillus cereus as described in EN-ISO 18465 - Microbiology of the food chain - Quantitative determination of emetic toxin (cereulide) using LC-MS/MS.. *International journal of food microbiology*, 288, 91-96. https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2018.03.021 
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 +Ducrest, P., Pfammatter, S., Stephan, D., Vogel, G., Thibault, P., & Schnyder, B. (2019). Rapid detection of Bacillus ionophore cereulide in food products. *Scientific Reports*, 9. https://doi.org/10.1038/s41598-019-42167-0 
 +  
 +Ramarao, N., Tran, S., Marin, M., & Vidić, J. (2020). Advanced Methods for Detection of Bacillus cereus and Its Pathogenic Factors. *Sensors (Basel, Switzerland)*, 20. https://doi.org/10.3390/s20092667 
 +  
 +Kalbhenn, E., Bauer, T., Stark, T., Knüpfer, M., Grass, G., & Ehling-Schulz, M. (2021). Detection and Isolation of Emetic Bacillus cereus Toxin Cereulide by Reversed Phase Chromatography. *Toxins*, 13. https://doi.org/10.3390/toxins13020115 
 +  
 +Masquelier, J., Segers, C., Jacobs, B., Van Nieuwenhuysen, T., Delbrassinne, L., & Van Hoeck, E. (2023). Validation of a Targeted LC–MS/MS Method for Cereulide and Application in Food and Faeces. *Toxins*, 16. https://doi.org/10.3390/toxins16010013 
 +  
 +Koike, H., Kanda, M., Monma, C., Yoshikawa, S., Hayashi, H., Matsushima, Y., Ohba, Y., Hayashi, M., Furuta, N., Okada, W., Nagano, C., Yokoyama, K., Yokoyama, T., & Sasamoto, T. (2024). Development of a simple screening method for analyzing cereulide toxin in fried rice using liquid chromatography-tandem mass spectrometry. *Forensic Toxicology*, 42, 163 - 171. https://doi.org/10.1007/s11419-024-00683-3 
 +  
 +Yamaguchi, M., Kawai, T., Kitagawa, M., & Kumeda, Y. (2013). A new method for rapid and quantitative detection of the Bacillus cereus emetic toxin cereulide in food products by liquid chromatography-tandem mass spectrometry analysis.. *Food microbiology*, 34 1, 29-37. https://doi.org/10.1016/j.fm.2012.11.010 
 +  
 +Delbrassinne, L., Andjelkovic, M., Rajković, A., Dubois, P., Nguessan, E., Mahillon, J., & Loco, J. (2012). Determination of Bacillus cereus Emetic Toxin in Food Products by Means of LC–MS². *Food Analytical Methods*, 5, 969-979. https://doi.org/10.1007/s12161-011-9340-z 
 +  
 +Dietrich, R., Jessberger, N., Ehling-Schulz, M., Märtlbauer, E., & Granum, P. (2021). The Food Poisoning Toxins of Bacillus cereus. *Toxins*, 13. https://doi.org/10.3390/toxins13020098 
 +  
 +Jovanovic, J., Ornelis, V., Madder, A., & Rajković, A. (2021). Bacillus cereus food intoxication and toxicoinfection.. *Comprehensive reviews in food science and food safety*. https://doi.org/10.1111/1541-4337.12785 
 +  
 +Marxen, S., Stark, T., Rütschle, A., Lücking, G., Frenzel, E., Scherer, S., Ehling-Schulz, M., & Hofmann, T. (2015). Multiparametric Quantitation of the Bacillus cereus Toxins Cereulide and Isocereulides A-G in Foods.. *Journal of agricultural and food chemistry*, 63 37, 8307-13. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.5b03705 
 +  
 +Cui, X., Wang, L., Liu, P., Duan, J., Zhao, R., & Fan, S. (2023). [Rapid confirmation method of food poisoning caused by Bacillus cereus cereulide in rice and flour products].. *Wei sheng yan jiu = Journal of hygiene research*, 52 4, 573-578. https://doi.org/10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2023.04.009 
 +  
 +Bauer, T., Stark, T., Hofmann, T., & Ehling-Schulz, M. (2010). Development of a stable isotope dilution analysis for the quantification of the Bacillus cereus toxin cereulide in foods.. *Journal of agricultural and food chemistry*, 58 3, 1420-8. https://doi.org/10.1021/jf9033046 
 +  
 +Rønning, H., Asp, T., & Granum, P. (2015). Determination and quantification of the emetic toxin cereulide from Bacillus cereus in pasta, rice and cream with liquid chromatography–tandem mass spectrometry. *Food Additives & Contaminants: Part A*, 32, 911 - 921. https://doi.org/10.1080/19440049.2015.1022886 
 +  
 +Doellinger, J., Schneider, A., Stark, T., Ehling-Schulz, M., & Lasch, P. (2019). Evaluation of MALDI-ToF Mass Spectrometry for Rapid Detection of Cereulide From Bacillus cereus Cultures. *Frontiers in Microbiology*, 11. https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.511674 
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 +====== E. BILAN ======
 ChapGPT semble plus précis. Développements très complets avec perplicity.ai ChapGPT semble plus précis. Développements très complets avec perplicity.ai
 Aucune technique n'est clairement commercialisée pour ce dosage. Aucune technique n'est clairement commercialisée pour ce dosage.

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