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bacilles_cereus_dosage_de_la_toxine [2026/02/05 11:50] – [a) Céréulide (toxine émétique)] techmicrobiobacilles_cereus_dosage_de_la_toxine [2026/02/07 11:24] (Version actuelle) – [## 3. Détection de la bactérie vs de la toxine] techmicrobio
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-Méthodes de référence et de recherche :+=== Méthodes de référence et de recherche : === 
  
 Bioessais sur cellules eucaryotes ou modèles animaux (historiquement utilisés), permettant de détecter l’activité toxique mais peu adaptés à la routine (lents, peu standardisés). Bioessais sur cellules eucaryotes ou modèles animaux (historiquement utilisés), permettant de détecter l’activité toxique mais peu adaptés à la routine (lents, peu standardisés).
  
-==== LC‑MS/MS (chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse) :====+=== LC‑MS/MS (chromatographie liquide couplée à la spectrométrie de masse) :===
  
 Permet la quantification directe de la céréulide dans des matrices alimentaires (riz, lait, plats cuisinés). Permet la quantification directe de la céréulide dans des matrices alimentaires (riz, lait, plats cuisinés).
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 Des limites de détection de l’ordre de 1 ng/g d’aliment ont été rapportées, adaptées au screening de lots. Des limites de détection de l’ordre de 1 ng/g d’aliment ont été rapportées, adaptées au screening de lots.
  
-==== MALDI‑TOF MS : ====+=== MALDI‑TOF MS : ===
  
 Protocoles récents permettent la détection rapide de la céréulide à partir d’un frottis de colonie de B. cereus ou directement à partir d’aliments. Protocoles récents permettent la détection rapide de la céréulide à partir d’un frottis de colonie de B. cereus ou directement à partir d’aliments.
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-Tests immuno‑enzymatiques (ELISA) ciblant les complexes Hbl, Nhe, CytK sont commercialisés et largement utilisés en recherche et parfois en diagnostic vétérinaire ou contrôle qualité. +  * Tests immuno‑enzymatiques (ELISA) ciblant les complexes Hbl, Nhe, CytK sont commercialisés et largement utilisés en recherche et parfois en diagnostic vétérinaire ou contrôle qualité. 
-​+  * PCR et qPCR de gènes codant ces toxines permettent de détecter des souches potentiellement productrices dans les aliments ou les isolats. 
 +  * LC‑MS/MS est également utilisée pour la détection/quantification de certaines entérotoxines, souvent en combinaison avec des approches culture + PCR.
  
-PCR et qPCR de gènes codant ces toxines permettent de détecter des souches potentiellement productrices dans les aliments ou les isolats. +Dans un contexte de TIAC, des combinaisons « dénombrement sur gélose + PCR des gènes toxiniques + LC‑MS/MS de la toxine » sont décrites pour documenter la responsabilité d’une souche émétis, y compris dans des enquêtes de terrain (restaurants, restauration collective). 
-​+===== 5. Pratique et techniques « éprouvées » en filière =====
  
-LC‑MS/MS est également utilisée pour la détection/quantification de certaines entérotoxines, souvent en combinaison avec des approches culture + PCR. 
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-Dans un contexte de TIAC, des combinaisons « dénombrement sur gélose + PCR des gènes toxiniques + LC‑MS/MS de la toxine » sont décrites pour documenter la responsabilité d’une souche émétis, y compris dans des enquêtes de terrain (restaurants, restauration collective). 
-5. Pratique et techniques « éprouvées » en filière 
 En filières industrielles et en contrôle officiel, les approches suivantes sont décrites comme robustes : En filières industrielles et en contrôle officiel, les approches suivantes sont décrites comme robustes :
  
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 Application de BPH/BPF pour limiter la survie des spores et la croissance (refroidissement rapide, stockage ≤ 3–4 °C, limitation des durées de vie, pH et aw défavorables). Application de BPH/BPF pour limiter la survie des spores et la croissance (refroidissement rapide, stockage ≤ 3–4 °C, limitation des durées de vie, pH et aw défavorables).
  
-Intégration de B. cereus et de ses spores dans les plans HACCP et plans de surveillance, avec points critiques sur les étapes de cuisson/refroidissement.+Intégration de //B. cereus// et de ses spores dans les plans HACCP et plans de surveillance, avec points critiques sur les étapes de cuisson/refroidissement.
  
 Surveillance microbiologique de routine : Surveillance microbiologique de routine :
  
-Dénombrement de B. cereus selon ISO 7932 à différents stades (matières premières, fin de fabrication, fin de vie produit), en particulier pour produits cuits réfrigérés, plats traiteur, riz, produits laitiers, poudres infantiles. +  * Dénombrement de B. cereus selon ISO 7932 à différents stades (matières premières, fin de fabrication, fin de vie   * produit), en particulier pour produits cuits réfrigérés, plats traiteur, riz, produits laitiers, poudres infantiles. 
- +  * Utilisation d’outils rapides (boîtes prêtes à l’emploi, kits immunologiques) comme pré‑screening, complétés par analyses de confirmation.
-Utilisation d’outils rapides (boîtes prêtes à l’emploi, kits immunologiques) comme pré‑screening, complétés par analyses de confirmation. +
-​+
  
 Utilisation ciblée des méthodes toxiniques (LC‑MS/MS, MALDI‑TOF) : Utilisation ciblée des méthodes toxiniques (LC‑MS/MS, MALDI‑TOF) :
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 MALDI‑TOF permet une détection physico‑chimique rapide et assez sensible de la céréulide, tandis que les bioessais détectent son activité biologique mais sont plus lents, moins standardisés et difficilement quantifiables. [frontiersin](https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.511674/full)   MALDI‑TOF permet une détection physico‑chimique rapide et assez sensible de la céréulide, tandis que les bioessais détectent son activité biologique mais sont plus lents, moins standardisés et difficilement quantifiables. [frontiersin](https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.511674/full)  
  
-===== ## Principe de chaque approche =====+==== ## Principe de chaque approche ====
  
  
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 - Bioessais : mise en évidence de l’effet mitochondrial de la toxine (gonflement de mitochondries de foie de rat, test HEp‑2, inhibition de la motilité spermatique), lecture par microscopie ou mesure de respiration. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/)   - Bioessais : mise en évidence de l’effet mitochondrial de la toxine (gonflement de mitochondries de foie de rat, test HEp‑2, inhibition de la motilité spermatique), lecture par microscopie ou mesure de respiration. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/)  
  
-===== ## Sensibilité et spécificité ===== +==== ## Sensibilité et spécificité ====
  
 - MALDI‑TOF :   - MALDI‑TOF :  
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   - Spécificité fonctionnelle : ces tests répondent essentiellement aux toxines mitochondriales de type céréulide; d’autres entérotoxines B. cereus ou S. aureus n’induisent pas la même inhibition de respiration mitochondriale. [pubmed.ncbi.nlm.nih](https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15665450/)     - Spécificité fonctionnelle : ces tests répondent essentiellement aux toxines mitochondriales de type céréulide; d’autres entérotoxines B. cereus ou S. aureus n’induisent pas la même inhibition de respiration mitochondriale. [pubmed.ncbi.nlm.nih](https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15665450/)  
  
-===== ## Rapidité, praticité, coût ===== +==== ## Rapidité, praticité, coût ====
  
 - MALDI‑TOF :   - MALDI‑TOF :  
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   - Coûts récurrents en matériel biologique, exigences de laboratoire de culture cellulaire, forte dépendance à l’expertise opérateur. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/)     - Coûts récurrents en matériel biologique, exigences de laboratoire de culture cellulaire, forte dépendance à l’expertise opérateur. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/)  
  
-===== ## Quantification et type d’information ===== +==== ## Quantification et type d’information ====
  
 - MALDI‑TOF :   - MALDI‑TOF :  
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   - Apport majeur pour répondre à la question : « la préparation contient‑elle une activité émétis fonctionnelle ? » même si plusieurs analogues contribuent à l’effet. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/)     - Apport majeur pour répondre à la question : « la préparation contient‑elle une activité émétis fonctionnelle ? » même si plusieurs analogues contribuent à l’effet. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/)  
  
-===== ## Limites et usages typiques ===== +==== ## Limites et usages typiques ====
  
 - MALDI‑TOF :   - MALDI‑TOF :  
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   - Plutôt réservés à la recherche et à quelques laboratoires de référence, utiles pour relier une concentration chimique à un effet biologique ou pour caractériser de nouveaux analogues. [pubmed.ncbi.nlm.nih](https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15665450/)     - Plutôt réservés à la recherche et à quelques laboratoires de référence, utiles pour relier une concentration chimique à un effet biologique ou pour caractériser de nouveaux analogues. [pubmed.ncbi.nlm.nih](https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15665450/)  
  
-===== ### En résumé opérationnel =====+==== ### En résumé opérationnel ====
  
 - Pour un laboratoire équipé en spectrométrie de masse cherchant un outil de routine sur les souches ou les aliments : MALDI‑TOF est nettement plus rapide, spécifique et intégrable dans le flux de travail que les bioessais. [frontiersin](https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.511674/full)   - Pour un laboratoire équipé en spectrométrie de masse cherchant un outil de routine sur les souches ou les aliments : MALDI‑TOF est nettement plus rapide, spécifique et intégrable dans le flux de travail que les bioessais. [frontiersin](https://www.frontiersin.org/articles/10.3389/fmicb.2020.511674/full)  
 - Pour des études mécanistiques ou la confirmation de la toxicité mitochondriale (corrélation dose‑effet, comparaison d’analogues) : les bioessais restent précieux car ils mesurent directement l’activité biologique de la céréulide et de ses dérivés. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/) - Pour des études mécanistiques ou la confirmation de la toxicité mitochondriale (corrélation dose‑effet, comparaison d’analogues) : les bioessais restent précieux car ils mesurent directement l’activité biologique de la céréulide et de ses dérivés. [pmc.ncbi.nlm.nih](https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC106152/)
-====== D. BILAN ====== +======= D. Consensus ====== 
-ChapGPT semble plus précis.+# **Détection de la toxine émétique de Bacillus cereus (céréulide) dans les aliments : normes et méthodes** 
 + 
 +**En pratique, les textes officiels s’appuient sur des méthodes LC‑MS/MS normalisées (notamment ISO 18465) pour **quantifier le céréulide** dans les aliments, complétées par des PCR sur les souches et quelques méthodes rapides comme le MALDI‑TOF.** 
 + 
 +===== ## 1. Textes officiels et normes ===== 
 + 
 +- Une méthode de référence européenne/ISO existe : **EN‑ISO 18465:2017**, basée sur LC‑MS/MS avec étalon interne, validée sur de nombreuses matrices (riz, pâtisseries, saucisses, pancakes, lait infantile, etc.)  (Veld et al., 2019; Masquelier et al., 2023; Dietrich et al., 2021; Bauer et al., 2010).   
 +- Cette norme est explicitement citée comme **méthode standard** pour les produits destinés à la consommation humaine  (Masquelier et al., 2023).   
 +- La validation inter‑laboratoires montre une **très bonne répétabilité et reproductibilité** (RSD généralement <10 %, recouvrements ≈ 95–100 %)  (Veld et al., 2019; Masquelier et al., 2023; Delbrassinne et al., 2012; Bauer et al., 2010). 
 + 
 +===== ## 2. Panorama des méthodes éprouvées ===== 
 + 
 + 
 +==== ### Méthodes chimiques / instrumentales ==== 
 + 
 + 
 +| Objectif | Méthode clé | Sensibilité / atouts | Citations | 
 +|---------|-------------|----------------------|-----------| 
 +| Quantification de référence | LC‑MS/MS (SIDA, étalon ^13C‑céréulide) | LOQ ~0,3–1 µg/kg ; haute justesse |  (Veld et al., 2019; Masquelier et al., 2023; Delbrassinne et al., 2012; Marxen et al., 2015; Bauer et al., 2010; Rønning et al., 2015)| 
 +| Variantes rapides matrices ciblées (riz, pâtes…) | LC‑MS/MS + QuEChERS ou extraction simplifiée | LOQ ~0,5–2 µg/kg, procédures simplifiées |  (Koike et al., 2024; Yamaguchi et al., 2013; Cui et al., 2023)| 
 +| Détection rapide sur colonies / screening aliments | MALDI‑TOF MS (avec ou sans matrice) | Détection directe de pics m/z 1175–1191 ; LOD jusqu’à 30 pg/mL |  (Ducrest et al., 2019; Koike et al., 2024; Dietrich et al., 2021; Doellinger et al., 2019)| 
 +| Méthodes de labo plus simples | Chromatographie en phase inversée (RPC) couplée ou non à MS | Outil robuste, économique pour recherche |  (Kalbhenn et al., 2021)| 
 + 
 +**Figure 1:** Principales méthodes validées pour doser le céréulide. 
 + 
 +===== ## 3. Détection de la bactérie vs de la toxine ===== 
 + 
 +- **Culture sur milieux sélectifs + dénombrement** reste la base pour les “B. cereus présomptifs”, mais ne renseigne pas sur la toxigénicité  (Ramarao et al., 2020; Jovanovic et al., 2021).   
 + 
 +- **PCR ciblant les gènes ces/ces‑NRPS** est le **gold standard** pour identifier les souches émétiques productrices de céréulide  (Meng et al., 2022; Ramarao et al., 2020; Dietrich et al., 2021; Jovanovic et al., 2021).   
 + 
 +- Les **méthodes immunologiques/bioessais** (HEp‑2, tests boar sperm, etc.) existent mais sont moins spécifiques que LC‑MS/MS pour le céréulide lui‑même  (Masquelier et al., 2023; Koike et al., 2024; Yamaguchi et al., 2013; Jovanovic et al., 2021).   
 + 
 +===== ## Conclusion ===== 
 + 
 +Les textes officiels et la pratique de laboratoire convergent : la **quantification du céréulide dans les aliments repose aujourd’hui principalement sur LC‑MS/MS normalisée (ISO 18465), avec étalon interne isotopique en référence**, la PCR servant à cribler les souches émétiques et le MALDI‑TOF comme outil rapide de confirmation ou de screening. 
 +  
 +_These search results were found and analyzed using Consensus, an AI-powered search engine for research. Try it at https://consensus.app. © 2026 Consensus NLP, Inc. Personal, non-commercial use only; redistribution requires copyright holders’ consent._ 
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 +## References 
 +  
 +Meng, J., Liu, Y., Shen, X., Wang, J., Xu, Z., Ding, Y., Beier, R., Luo, L., Lei, H., & Xu, Z. (2022). Detection of emetic Bacillus cereus and the emetic toxin cereulide in food matrices: Progress and perspectives. *Trends in Food Science &amp; Technology*. https://doi.org/10.1016/j.tifs.2022.03.023 
 +  
 +Veld, P., Van Der Laak, L., Zon, M., & Biesta-Peters, E. (2019). Elaboration and validation of the method for the quantification of the emetic toxin of Bacillus cereus as described in EN-ISO 18465 - Microbiology of the food chain - Quantitative determination of emetic toxin (cereulide) using LC-MS/MS.. *International journal of food microbiology*, 288, 91-96. https://doi.org/10.1016/j.ijfoodmicro.2018.03.021 
 +  
 +Ducrest, P., Pfammatter, S., Stephan, D., Vogel, G., Thibault, P., & Schnyder, B. (2019). Rapid detection of Bacillus ionophore cereulide in food products. *Scientific Reports*, 9. https://doi.org/10.1038/s41598-019-42167-0 
 +  
 +Ramarao, N., Tran, S., Marin, M., & Vidić, J. (2020). Advanced Methods for Detection of Bacillus cereus and Its Pathogenic Factors. *Sensors (Basel, Switzerland)*, 20. https://doi.org/10.3390/s20092667 
 +  
 +Kalbhenn, E., Bauer, T., Stark, T., Knüpfer, M., Grass, G., & Ehling-Schulz, M. (2021). Detection and Isolation of Emetic Bacillus cereus Toxin Cereulide by Reversed Phase Chromatography. *Toxins*, 13. https://doi.org/10.3390/toxins13020115 
 +  
 +Masquelier, J., Segers, C., Jacobs, B., Van Nieuwenhuysen, T., Delbrassinne, L., & Van Hoeck, E. (2023). Validation of a Targeted LC–MS/MS Method for Cereulide and Application in Food and Faeces. *Toxins*, 16. https://doi.org/10.3390/toxins16010013 
 +  
 +Koike, H., Kanda, M., Monma, C., Yoshikawa, S., Hayashi, H., Matsushima, Y., Ohba, Y., Hayashi, M., Furuta, N., Okada, W., Nagano, C., Yokoyama, K., Yokoyama, T., & Sasamoto, T. (2024). Development of a simple screening method for analyzing cereulide toxin in fried rice using liquid chromatography-tandem mass spectrometry. *Forensic Toxicology*, 42, 163 - 171. https://doi.org/10.1007/s11419-024-00683-3 
 +  
 +Yamaguchi, M., Kawai, T., Kitagawa, M., & Kumeda, Y. (2013). A new method for rapid and quantitative detection of the Bacillus cereus emetic toxin cereulide in food products by liquid chromatography-tandem mass spectrometry analysis.. *Food microbiology*, 34 1, 29-37. https://doi.org/10.1016/j.fm.2012.11.010 
 +  
 +Delbrassinne, L., Andjelkovic, M., Rajković, A., Dubois, P., Nguessan, E., Mahillon, J., & Loco, J. (2012). Determination of Bacillus cereus Emetic Toxin in Food Products by Means of LC–MS². *Food Analytical Methods*, 5, 969-979. https://doi.org/10.1007/s12161-011-9340-z 
 +  
 +Dietrich, R., Jessberger, N., Ehling-Schulz, M., Märtlbauer, E., & Granum, P. (2021). The Food Poisoning Toxins of Bacillus cereus. *Toxins*, 13. https://doi.org/10.3390/toxins13020098 
 +  
 +Jovanovic, J., Ornelis, V., Madder, A., & Rajković, A. (2021). Bacillus cereus food intoxication and toxicoinfection.. *Comprehensive reviews in food science and food safety*. https://doi.org/10.1111/1541-4337.12785 
 +  
 +Marxen, S., Stark, T., Rütschle, A., Lücking, G., Frenzel, E., Scherer, S., Ehling-Schulz, M., & Hofmann, T. (2015). Multiparametric Quantitation of the Bacillus cereus Toxins Cereulide and Isocereulides A-G in Foods.. *Journal of agricultural and food chemistry*, 63 37, 8307-13. https://doi.org/10.1021/acs.jafc.5b03705 
 +  
 +Cui, X., Wang, L., Liu, P., Duan, J., Zhao, R., & Fan, S. (2023). [Rapid confirmation method of food poisoning caused by Bacillus cereus cereulide in rice and flour products].. *Wei sheng yan jiu = Journal of hygiene research*, 52 4, 573-578. https://doi.org/10.19813/j.cnki.weishengyanjiu.2023.04.009 
 +  
 +Bauer, T., Stark, T., Hofmann, T., & Ehling-Schulz, M. (2010). Development of a stable isotope dilution analysis for the quantification of the Bacillus cereus toxin cereulide in foods.. *Journal of agricultural and food chemistry*, 58 3, 1420-8. https://doi.org/10.1021/jf9033046 
 +  
 +Rønning, H., Asp, T., & Granum, P. (2015). Determination and quantification of the emetic toxin cereulide from Bacillus cereus in pasta, rice and cream with liquid chromatography–tandem mass spectrometry. *Food Additives & Contaminants: Part A*, 32, 911 - 921. https://doi.org/10.1080/19440049.2015.1022886 
 +  
 +Doellinger, J., Schneider, A., Stark, T., Ehling-Schulz, M., & Lasch, P. (2019). Evaluation of MALDI-ToF Mass Spectrometry for Rapid Detection of Cereulide From Bacillus cereus Cultures. *Frontiers in Microbiology*, 11. https://doi.org/10.3389/fmicb.2020.511674 
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 +====== E. BILAN ====== 
 +ChapGPT semble plus précis. Développements très complets avec perplicity.ai
 Aucune technique n'est clairement commercialisée pour ce dosage. Aucune technique n'est clairement commercialisée pour ce dosage.
  

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